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離心機怎麽提取乳酸脫氫酶及輔酶 ?

日期 :2021年04月06日   信息來源 :www.sherrys50thbirthday.com

  離心機可以應用於乳酸脫氫酶及輔酶的提取 。乳酸脫氫酶 ,是一種不需氧脫氫酶 ,以輔酶I(NAD﹢)為輔酶 ,催化乳酸與丙酮酸的可逆的氧化還原反應 。肌肉中含有大量的乳酸脫氫酶 ,在乳酸含量較高及氧氣充足情況下 ,催化乳酸生成丙酮酸 ,體外實驗中 ,為觀察方便 ,在隔絕空氣後以甲烯藍作為受氫體 ,井用固定反應中生成的丙酮酸 ,而使乳酸全部轉化為丙酮酸 。今天凱時KB88會員登錄對如何通過離心機提取乳酸脫氫酶及輔酶I進行介紹 。
 
  通過離心提取乳酸脫氫酶及輔酶用到的材料 、試劑及設備有 :(1)動物後腿肌肉;(2)9g/LNaCl溶液;(3)活性炭;(4)10g/L乳酸鋰溶液;(5)5g/LKCN溶液;(6)乳缽;(7)離心機等
 
  具體操作方法 :
 
  1.輔酶I(NAD﹢)的製備 :取動物後腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分鍾(抑製酶的活力 ,防止將輔酶I破壞) ,取出冷卻 、剪碎 ,加入少許9g/LNaCl溶液及細沙用乳缽研磨成糊狀 ,再加9g/LNaCl溶液8ml混勻 ,利用離心機進行離心沉澱 ,收集上清液 ,儲冰箱備用 。
 
  2.乳酸脫氫酶酶蛋白的提取 :取動物後腿肌肉2g置乳缽中 ,加入少許9g/LNaCl溶液及細砂 ,仔細研磨後再加9g/LNaCl溶液8ml混勻 ,用雙層紗布過濾 ,濾液加活性炭0.5g振搖數分鍾後放置半小時 ,並時常搖動 ,然後通過離心機離心分離 ,取上清液備用 。

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